Exosomes整体解决方案

产品概述

外泌体定义

外泌体(exosome)是由细胞内多泡体(multivesicular body, MVB) 与细胞膜融合后, 释放到细胞外基质中的一种直径约30~120nm 的膜性囊泡。

外泌体生物合成

各种细胞都能以类似的方式生成exosome。细胞通过内吞作用产生小囊泡融合形成初级内体(early endosome),并逐渐变为次级内体(late endosome)。随着胞质内RNA、蛋白等“货物”的进入,次级内体的界膜多处凹陷,向内出芽形成囊泡,演变成多泡体(multivesicular body,MVB);随后与细胞膜融合后,其内的囊泡被释放到胞外,形成exosome。

外泌体内容物

外泌体内容物与其来源的细胞有关,主要有蛋白及核酸两大类,蛋白通常含有MHC I类和/或II类分子、热休克蛋白、四跨膜蛋白、整合素、细胞骨架蛋白等,CD63,HSP70,TSG101通常作为外泌体标记物;外泌体内同时含有丰富的RNA分子,自2007年Hadi Valadi首次在肥大细胞外泌体中发现mRNA和miRNA,ExoCarta数据库已收录文献报道的3408个mRNA及2838个miRNA分子。


外泌体生物学功能

exosome最初在网织红细胞中被发现,参与细胞内浆膜及蛋白的选择性去除。近些年的研究表明外泌体具备运输功能,外泌体所携带的的“货物”,随外泌体释放入体液,循环到达其它部位。部分肿瘤中的研究发现,有些miRNA会通过外泌体到达其他细胞组织,调控肿瘤侵袭、转移、耐药、微环境。外泌体与来源细胞的密切关联,赋予外泌体潜在的生物标记,能用于疾病的诊断及预后观察。外泌体的特殊组成,保证它能够广泛参与到细胞通讯中,可能成为精准的药物释放系统。



研究思路

表达差异筛选:高通量测序,蛋白质组学,数据库筛选

生物信息学分析:miRNA、lncRNA、circRNA表达差异分析;蛋白表达差异分析;miRNA sponge、ceRNA、RBP分析;

功能探索:差异验证、功能获得性及缺失性研究、转录组学、蛋白质组学

临床意义:转基因动物模型构建、疾病动物模型、临床数据库建设、临床数据个性化分析。

外泌体分离及鉴定

自主研发、广泛适用的高效、特异分离试剂盒,透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope)及纳米颗粒示踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis)确证大小,免疫印迹(Western blot)验证标记蛋白




高通量测序及蛋白质组学

测序:微量建库技术、覆盖编码及非编码RNA、Illumina HiSeq测序平台

蛋白质组学:领先的液质联用平台、完善的定量蛋白质组学研究方案


生物信息学分析

核酸、蛋白联合分析揭示外泌体货物蛋白、非编码RNA深度分析阐明外泌体精细调控



验证及功能研究

内标记(CD63融合蛋白稳定细胞系)及外标记(PKH67)技术精准追踪外泌体潜在靶点;功能获得性及缺失性研究揭示外泌体货物蛋白的调控机理;转基因动物模型证实临床转化潜力。


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